91年の発行から改訂を重ね,ついに第5版!長年の実績がある本書なら,必須&重要な実験法をしっかりカバーできます.小分子RNAの実験法やハイスループット解析など,注目の新技術も余さず収録!
目次
概 論 ゲノム科学からシステムバイオロジーに進む時代の遺伝子工学【山本 雅】
第1章 核酸の調製
1. 培養細胞,組織からのDNA,RNAの抽出【酒井正春】
2. レーザーマイクロダイセクションによる組織・病変内の細胞からの核酸抽出【伊藤彰彦/木村恵子】
3. 小分子RNAの単離と精製【齋藤都暁】
第2章 遺伝子クローニング
1. 単一細胞cDNA増幅法【栗本一基/斎藤通紀】
2. 完全長cDNAライブラリーの作製
- 完全長cDNAライブラリーの作製 ~オリゴキャッピング法【鈴木 穣/菅野純夫】
- キャップトラップ法を用いた完全長cDNAライブラリーの作製【梶山和浩/川路英哉】
3. cDNAクローニング
- DNAプローブによるクローニング【野村信夫】
- 抗体を用いたcDNAクローニング【谷口武利】
- サウスウエスタンブロット法によるクローニング【宮本昌明】
- 酵母2ハイブリッド法【山口佳洋】
4. suppression subtractive hybridization【松尾俊彦】
5. Gateway・Multisite Gatewayクローニング法【曽根岳史/西海史子/今本文男】
6. 突然変異体遺伝子の作製法【井川俊太郎】
7. RACE法【和田 智/江口英孝】
第3章 遺伝子・ゲノムの構造解析
1. サザンブロットハイブリダイゼーション法 ~癌細胞等におけるゲノムDNA変化の検出【河野隆志】
2. PCR-SSCP法【田平知子/林 健志】
3. バイサルファイトPCR法【鈴木 拓/豊田 実】
4. high resolution melting法【沖田規幸】
第4章 遺伝子の発現解析
1. RNAの検出
- ノーザンブロッティング【酒井正春】
- RT-PCR ~mRNA,小分子 RNAの検出【江口英孝/和田 智】
- リアルタイムPCR【江口英孝/和田 智】
2. in situハイブリダイゼーション
- 組織切片のin situハイブリダイゼーション【小山佳久/遠山正彌】
- ホールマウントin situハイブリダイゼーション~マウス胚を例として【高橋 雄】
3. クロマチン免疫沈降法(ChIP assay)【小野寺 淳/中山俊憲】
4. RNaseプロテクションアッセイ【西本正純】
5. in vitro転写法【田村隆明】
6. ゲルシフトアッセイ【石田尚臣/山口憲孝/井上純一郎】
7. DNaseⅠフットプリンティング法【田上英明/饗場弘二】
第5章 細胞への核酸導入と機能解析
1. トランスフェクション法【佐伯和子/横溝岳彦】
2. ウイルスによる遺伝子導入法
- アデノウイルスベクターを用いた遺伝子発現【鐘ヶ江裕美/斎藤 泉】
- レトロウイルスによる遺伝子導入法【北村俊雄】
3. 遺伝子のマイクロインジェクション【千田和広】
4. 培養細胞のノックダウン法
- 特異的遺伝子ノックダウンのためのsiRNA選択法 ~哺乳類細胞において【内藤雄樹/程 久美子】
- siRNAおよびmiRNAによる遺伝子ノックダウン【西 賢二/程 久美子】
第6章 遺伝子産物の機能解析
1. モノクローナル抗体の作製【小谷政晴/久保英夫】
2. ポリクローナル抗体の作製【手塚 徹】
3. 免疫沈降法【秋山 徹】
4. GST融合タンパク質沈降法【三浦賢司】
5. タンパク質検出法 ~ウエスタンブロッティング【入野康宏/伊藤俊樹】
6. 質量分析計を用いたタンパク質複合体解析【藤山 (中村) 沙理/加藤茂明】
7. ルシフェラーゼアッセイ【中井敦子/須藤龍彦】
8. 蛍光イメージングを利用した遺伝子機能解析
- 各種蛍光タンパク質を用いた解析【田村照子/Alexandra Koch】
- FRET法【安藤康史/福原茂朋/望月直樹】
9. 細胞,組織の免疫染色による発現解析【渡辺雅彦】
第7章 個体レベルの解析
1. トランスジェニックマウスの作製法【多田卓哉/劉陽/岩倉洋一郎】
2. ジーンターゲティング
- ターゲティングベクターの作製とES細胞への導入【高野洋志/八尾良司】
- マイクロインジェクション法による変異マウスの作製【美野輪 治】
- アグリゲーション法によるキメラマウスの作製【角田 茂/佐藤 希/久保幸子/岩倉洋一郎】
- コンディショナルターゲティング法【角田 茂/岩倉洋一郎】
3. マウス胚の凍結保存【小田佳奈子/横山峯介】
4. 臓器・組織への遺伝子導入
- ウイルスベクターを用いた生体臓器への遺伝子導入 ~脳を例として【平井宏和】
- アテロコラーゲンおよびゼラチンハイドロゲルを用いた動物への核酸導入【城 潤一郎/田畑泰彦】
第8章 ハイスループットな手法
1. ハイスループット解析のパイプライン【鈴木治和】
2. DNAマイクロアレイ【水野洋介/岡﨑康司】
3. 次世代シークエンサーとRNAの解析【河合 純/池谷美香】
4. ChIP-seq, ChIP-on-chip ~ChIP-seqを中心に【野中 綾/油谷浩幸】
5. メチル化DNAの解析 ~DNAメチル化解析のパイプラインとMeDIP-Seq法【永江玄太/油谷浩幸】
6. SNP遺伝子型データ解析とタイピング手法 ~患者・対照関連解析を例として【秋山康一/井ノ上逸朗】
7. ハイコンテントアナリシスにおける細胞イメージング解析【山崎 聡/小山良代/中内啓光】
- 見やすくわかりやすい。各研究者のpractical tipsが非常に有用である。とかくトレーニング不足になりがちのmedical scientistは必携であろう。
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- 【本書名】実験医学別冊 実験ハンドブックシリーズ:改訂第5版新遺伝子工学ハンドブック
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