発現解析、ノックダウン、遺伝子導入...タンパク質の機能解析に至る具体的方法・手技を徹底解説。各方法の比較だけでなく、実験のプロによるコツ、さらには実験デザインまで。実験の見通しがグンとよくなる!
目次
1章 発現戦略
1 機能を調べるための実験デザイン【北村義浩】
2 各種蛍光タンパク質の使い分け【三輪佳宏】
2章 発現と機能の抑制戦略
1 遺伝子抑制解析の動向と戦略【武内恒成/河㟢麻実】
2 遺伝子抑制法の種類とメカニズム【萩原啓太郎/落谷孝広】
3 章 RNAi 実験の準備と実践
1 RNAi の原理【程久美子/北條浩彦】
2 siRNA デザインの方法と検索ウェブサイト【程久美子】
3 修飾基のついたsiRNA のRNAi 効果とその選択【西賢二/高橋朋子/長沢達矢/程久美子】
4 siRNA,dsRNA の取扱いと導入の基本【北條浩彦】
5 shRNA 発現ベクターの構築と導入の基本【松下夏樹】
4章 遺伝子導入実験プロトコール
【DNA,RNA を導入する】
1 リポフェクション法【内野慧太/落谷孝広】
2 エレクトロポレーション法による細胞・組織への導入
- 培養細胞へのNEPA21 を用いた遺伝子導入【舛廣善和/小島裕久】
- 培養細胞へのGene Pulser MXcell を用いた遺伝子導入【藤木亮次】
- 電気パルスを用いた筋肉への遺伝子導入【宮崎純一/宮崎早月】
- ニワトリ胚への遺伝子強制発現およびノックダウン【仲村春和】
3 エレクトロポレーション法による神経細胞への導入
- 子宮内胎仔脳への遺伝子導入【田畑秀典/久保健一郎/仲嶋一範】
- 網膜への遺伝子導入【松田孝彦】
- 培養皿上の成熟神経細胞への遺伝子導入【田谷真一郎/星野幹雄】
- 分散した神経細胞へのキュベット電極を用いた遺伝子導入【楠澤さやか/仲嶋一範】
- 脳スライス培養への遺伝子導入【石田綾/岡部繁男】
4 超音波遺伝子導入法【立花克郎】
5 レーザー熱膨張式微量インジェクターを用いた試料導入【筒井大貴/東山哲也】
6 アテロコラーゲンを用いた生体siRNA デリバリー法【竹下文隆/落谷孝広】
7 コレステロールを用いた生体内でのsiRNA デリバリー法【桑原宏哉/仁科一隆/横田隆徳】
【ウイルスベクターを導入する】
8 ウイルスベクターの特徴と原理,製品など【北村義浩】
9 レトロウイルスベクターによる高効率遺伝子導入法【北村俊雄/高橋まり子】
10 レンチウイルスベクター【北村義浩】
11 E1 欠損型アデノウイルスベクター【三谷幸之介】
【タンパク質を導入する】
12 タンパク質直接細胞内導入法【道上宏之/松井秀樹】
5章 遺伝子導入実験におけるカルタヘナ法および関連法令
1 カルタヘナ法【三浦竜一】
2 関連法令【三浦竜一】
付録・Tag 抗体リスト【仲嶋一範/北村義浩/武内恒成】
Column
1 遺伝子抑制法(RNAi 法)の発展のために【武内恒成】
2 RNAi による治療への試み【桑原宏哉/仁科一隆/横田隆徳】
3 shRNA ライブラリースクリーニング【恵口 豊】
4 ケージドDNA/RNA を用いる遺伝子発現の光制御【古田寿昭】
5 トランスポゼースを用いた遺伝子発現【高橋淑子】
6 針電極を使った視床への導入法と,そのエッセンス【下郡智美/松居亜寿香】
ONEPOINT
- 遺伝子銃
- ノックダウンとノックアウトの違い
- 長鎖dsRNA でもRNAi を観察(誘導)できる哺乳動物細胞
- 配列選択のルール
- トランスフェクション効率の影響
- サイドエフェクトと発現リーク
- 超音波の基本知識
- コレステロール結合siRNAの細胞内でのプロセシング
- 抽出したHDL の特性の確認
- レトロウイルスゲノムのスプライシング
- HIV ベクターの実験分類
- mock infection
- 濃縮法
- コンフルエンシーと過増殖
- アデノウイルス使用実験の一般的な注意点
- ベクターの力価の確認方法
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- 【本書名】実験医学別冊 目的別で選べるシリーズ:目的別で選べる遺伝子導入プロトコール〜発現解析とRNAi実験がこの1冊で自由自在!最高水準の結果を出すための実験テクニック
- 【出版社名】羊土社
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