バイオ実験 誰もがつまずく失敗＆ナットク解決法

序

本書の構成

１章　実験基本操作

１．基本器具・機器

Case 01　ガラス器具の汚れがとれなくなってしまった ガラス器具の洗浄 ◆

Case 02　固体の試薬を直接メスフラスコに入れてしまった 体積計 ◆

Case 03　ガラスピペットをオートクレーブ滅菌してしまった 器具の滅菌 ◆

Case 04　ポリエチレン製ピペットを使ってクロロホルムを分注したら，ピペットが溶けてしまった プラスチック器具 ◆

Case 05　遠心分離の際，遠心管がこわれ，溶液がこぼれてしまった 遠心分離機 ◆

Case 06　オートクレーブをかけたら，噴き出した オートクレーブ ◆

２．分光光度計

Case 07　吸光度を測定しようとしたら，値が安定しなかった 分光光度計の使用法 ◆

Case 08　吸光度がばらつき，検量線が直線にならなかった 吸光度と検量線 ◆

３．電気泳動（PAGE）

Case 09　SDS-PAGEでバンドが乱れてしまった SDS-PAGEバンドの乱れ ◆

Case 10　SDS-PAGEで巨大なバンドやテーリング（縦スジ）がみられた SDS-PAGEの試料調製 ◆

Case 11　CBB染色が上手くいかなかった ゲル染色 ◆

４．電気泳動（アガロース）

Case 12　エチジウムブロマイド染色したゲルにUV照射しながらバンドを切り出していたらバンドが消えてしまった ゲルの切り出し ◆

Case 13　高濃度のアガロースゲルをつくろうとしたが，加熱しても溶けなかった アガロースの性質 ◆

Case 14　アガロースゲルを蒸留水で作製してしまった アガロースゲルの作製 ◆

５．ブロッティング

Case 15　ウエスタンブロッティングで，バックグラウンドノイズが高くなってしまった シグナルノイズ比の向上 ◆

Case 16　ウエスタンブロッティングでタンパク質が転写されなかった ブロッティング効率 ◆

６．試薬調製

Case 17　試薬を正確に分取・ 秤量できなかった 試薬の保存・分取・秤量 ◆

Case 18　バッファー調製の際，実験書どおりに混ぜたのに，pHが合わなかった pH調整 ◆

Case 19　Tween20の化学名がわからず試薬棚を探してしまった 化学名と慣用名 ◆

Case 20　試薬を調製しようとしたが，試薬が溶解しなかった 試薬の溶解 ◆

Case 21　タンパク質を水に溶かそうとしたら固まりになってしまった タンパク質の溶解（溶媒和） ◆

Case 22　界面活性剤を水に溶解させようとしたら泡だらけになってしまった 界面活性剤の性質 ◆

７．PCR

Case 23　電気泳動でPCR産物の増幅確認を行ったら，非特異的なバンドが生じていた PCRの反応条件 ◆

Case 24　10 kbpのDNAをターゲットにしたPCRを行ったが，増幅産物が得られなかった 長いDNAのPCR ◆

Case 25　試料から抽出したDNAを用いてPCRを行ったが増幅されなかった 抽出DNAのPCR増幅 ◆

Case 26　PCRのネガティブコントロールが増えてしまった コンタミネーション ◆

８．キット

Case 27　キットの凍結乾燥品を希釈しすぎてしまった 溶液の濃度調整 ◆

Case 28　キットのプロトコールに従ったが上手くいかなかった キットの推奨プロトコール ◆

Case 29　欲しい試薬やキットが見つからない，選び方がわからない キットの選び方 ◆

２章　材料の調製—微生物，細胞・組織，動物

１．微生物

Case 30　クリーンベンチでの植え継ぎで最近コンタミが多い クリーンベンチ ◆

Case 31　組換え大腸菌のコロニーを冷蔵庫に３カ月放置してしまった コロニーの保存 ◆

Case 32　土壌から微生物のDNAを抽出しようとしたが，DNAを回収できなかった 微生物のDNA抽出 ◆

Case 33　微生物を培養するために寒天培地を用意したが，固まらなかった 寒天培地 ◆

Case 34　植えたはずの微生物が生えてこなかった 微生物の植菌操作 ◆

Case 35　原理を熟知しているのに酵素をうまく精製できなかった 微生物酵素の精製 ◆

Case 36　カビが胞子を形成しなかった カビ胞子の形成 ◆

２．細胞

Case 37　細胞培養していたらカビが生えてしまった 細胞培養とカビ ◆

Case 38　接着細胞を植え継ぎしようとしたら，細胞が容器からはがれなかった 接着細胞の剥離 ◆

Case 39　接着細胞が容器からはがれて死んでしまった 接着細胞の培養 ◆

Case 40　培養細胞が増えなかった/増えすぎた 培養細胞の維持 ◆

Case 41　細胞数の計数値がばらついた 細胞数の計測 ◆

Case 42　細胞の植え継ぎの際，フタを開けた容器の上に手をかざしてしまった 動物細胞の植え継ぎ ◆

３．病理組織

Case 43　パラフィン切片からのDNA抽出がうまくいかなかった 病理組織からのDNA抽出 ◆

Case 44　パラフィン包埋組織から抽出したDNAを使ったら，うまくPCRで増幅できなかった 病理組織のPCR ◆

Case 45　切片にて組織内のどこが目的の部分なのか判別できなくなった 組織の分離 ◆

Case 46　パラフィン切片からのRNA抽出がうまくいかず，PCRがかからなかった 病理組織からのRNA抽出 ◆

Case 47　凍結標本からRNAを抽出したが，壊れてしまった 凍結組織からのRNA抽出 ◆

Case 48　パラフィン切片の保存が上手くできていなかった 切片の管理 ◆

Case 49　厚い切片を切ったら，パラフィンブロックが壊れてしまった 切片の厚さ ◆

Case 50　免疫組織染色で切片が染まらなかった 免疫染色 ◆

Case 51　脱パラフィン，または染色中に組織がはがれた 操作中の組織の消失 ◆

４．動物

Case 52　実験動物がいなくなった/死んでしまった 飼育管理（１） ◆

Case 53　実験動物のえさの与え方がわからなかった 飼育管理（２） ◆

Case 54　実験中に麻酔が切れてしまった 動物の麻酔 ◆

３章　材料の調製—DNA，RNA，タンパク質

１．タンパク質

Case 55　ELISAで値が以前に比べ大幅に変わってしまった 抗体の力価と保存 ◆

Case 56　抗体をマイクロプレートやマイクロビーズに吸着させたら活性が低下してしまった 抗体の疎水吸着 ◆

Case 57　抗体をアフィニティー精製カラムで精製したが回収率が低かった　抗体の精製 ◆

Case 58　抗体に標識したら活性が著しく低下してしまった 抗体の標識 ◆

Case 59　細胞表面を選択的にタグ標識して抽出したが，アフィニティー精製物に夾雑がみられた 細胞表面のビオチン化 ◆

Case 60　タンパク質間相互作用検出で共免疫沈降がうまくいかなかった　タンパク質間相互作用 ◆

Case 61　タンパク質の定量を行ったが，値が極端に低い/高い/ばらついた　タンパク質の定量 ◆

２．核酸（DNA・RNA）

Case 62　DNAを蒸留水中に保存してしまった DNAの保存 ◆

Case 63　DNA溶液の凍結融解を繰り返してしまった　DNAの凍結融解 ◆

Case 64　PCR産物のシークエンシングを行ったが，配列を決定できなかった　シークエンシング ◆

Case 65　エタノール沈殿したが，沈殿が全く見えなかった　エタノール沈殿 ◆

Case 66　DNA検体をガラス器具で扱ってしまった DNAの取り扱い ◆

Case 67　RNAを滅菌していない蒸留水に溶かしてしまった　RNAの溶解 ◆

Case 68　滅菌水に溶解したRNA溶液を冷蔵庫に保存してしまった　RNAの保存 ◆

４章　実験環境

１．試薬管理

Case 69　分液ロートを振っていたら，中身が噴出した 有機溶媒の取り扱い ◆

Case 70　ビンを倒して，塩酸を大量にこぼしてしまった 劇物の取り扱い ◆

Case 71　反対側の実験台の人のRIで被曝してしまった？ RI実験① ◆

Case 72　RI実験中にホットをこぼしてしまった RI実験② ◆

Case 73　ニンヒドリン反応をしようとしたら，指紋まで染まってしまった　検出試薬の取り扱い ◆

Case 74　生物試料をドライアイスとともに海外に輸送しようとしたが送れなかった　生物由来物質の輸送 ◆

２．実験室管理

Case 75　ゴミ箱に注射針が入っていて，けがをした 実験廃棄物 ◆

Case 76　停電でフリーザーの試料が溶解してしまった 試料の保存 ◆

Case 77　ガスバーナーの火で天井のセンサーが作動してしまった　実験と火災 ◆

Case 78　使い残しの試薬を水に流したら流しの色が変わってしまった 試薬の危険有害性と安全管理 ◆

Case 79　実験機器が故障してしまった 機器の管理 ◆

３．データ管理

Case 80　過去に行った実験データと検体が結びつかなくなった　実験データの管理 ◆

Case 81　効率が悪く，実験が進まなかった 実験効率 ◆

Case 82　しまったはずのサンプルが見つからなかった サンプル管理 ◆

Case 83　得られたデータを信用してもらえなかった 測定データの信用性 ◆

Case 84　インターネットに出ていた実験方法を採用したら失敗した インターネットの情報 ◆

Case 85　パソコンに保存していた実験データがなくなってしまった　PC保存データ ◆

付録バイオ実験お役立ち書籍＋α

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