クローズアップ実験法

2022年11月号 Vol.40 No.18 詳細ページ
腸管まるごと切片化「腸管ロール」の作製方法
白戸孝明，大久保和央
352 腸管まるごと切片化 「腸管ロール」の作製方法 白戸孝明,大久保和央 何ができるようになった? マウスやラットの小腸や大腸はとても長い組織であるため,一部を切りとっての観察が一般的であ るが,部分的な観察しかできない.腸管全体をロール状に巻くと,一枚のスライドガラス上で見たい 領域をすべて観察することができる. 必要な機器・試薬・テクニックは? 病理標本を作製,染色まで行うことできる環境が必要となる.組織を固定液に浸漬しながら作業す ることになるが ,完全に固定される前 ,形が固まる前に成形する必要があるため ,操作の慣れとス ピードが要求される. 原理 であるが,難易度も高い.本稿ではきれいな標本を作 小腸や大腸における研究において組織内での局在解 製する方法を解説する. 析は必須であるが,非常に長い組織なので通常はごく 腸管に限らず,組織や細胞中のタンパク質,RNA を 一部分を摘出して観察することになる.スライドガラ すばやく安定化するために最も重要なポイントは,一 スに乗せられる長さから,一度に観察できる範囲は限 秒でも早く組織中に固定液を浸透,拡散させることで られてしまう.しかし,同じように見える場所でも発 ある.この固定液に漬けるまでの時間をできるだけ短 現パターンの異なる遺伝子やタンパク質が存在するた くすることが ,免疫染色や め,より正確な情報を得るためには複数の場所で染色 ションを成功させる一番のコツとなり,組織の種類に を行う必要がある.また,投薬による変化や siRNA な より最適な固定方法を選択する必要がある.腸管では どの外部から導入した遺伝子を検出する場合にも,部 血流に乗せて固定液を浸透させる灌流固定よりも,摘 分的な観察では不十分で,できるだけ広い範囲を見る 出後に手早く固定液に浸漬させる方が,固定スピード 必要がある .筆者らは ,マウスの腸管で R N A やタン が速い.また,腸管内には消化酵素が含まれるため自 パク質の局在解析を行う場合,胃の終わりから十二指 己消化が早く,他の組織よりもさらに迅速な固定が要 腸,空腸,回腸,盲腸,結腸,直腸までをロール状に 求される. ハイブリダイゼー 巻き,一度にすべての領域を観察している.この手法 腸管ロールの作製工程では,固定液に浸漬させた後 はスイスロールとよばれ,古くから行われている方法 も重要である .固定液中でしばらく放置しておくと , Swiss rolls of mouse intestine Takaaki Shiroto/Kazue Okubo:GENOSTAFF CO., LTD.(ジェノスタッフ株式会社) 実験医学 Vol. 40 No. 18(11 月号)2022 3017
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