クローズアップ実験法

2024年3月号 Vol.42 No.4 詳細ページ
市販の酵素を混ぜるだけの相同組換えDNAクローニング
Alexander Y. Liu，古賀大翔，合屋智尋，北畠　真
367 市販の酵素を混ぜるだけの 相同組換えDNAクローニング Alexander Y. Liu,古賀大翔,合屋智尋,北畠 真 何ができるようになった? プラスミドを作製する際にしばしば使われる「相同組換え DNA クローニング」 .高価なキットを買 わずに,安価な市販の酵素で代用する方法を紹介する. 必要な機器・試薬・テクニックは? PCR を行うためのサーマルサイクラーを反応に使用する.市販の酵素を希釈して組合わせるだけで よく,学部生の初心者でもうまく使いこなせている. はじめに (Seamless Ligation Cloning Extract) 」法であった 3). 遺伝子断片をプラスミドに挿入する「DNA クローニ これは大腸菌を界面活性剤で処理するだけで相同組換 ング」は ,分子生物学の研究に不可欠の技術である . え活性をもつ溶液が得られる,という驚くべき方法で 1973 年に「制限酵素」と「D N A リガーゼ」を用いる ある.北畠は Liu ら iGEM 4)Kyoto の学生たちとこの方 近代的な方法が開発されて以来,50 年にわたってこの 法を使用するうちに,この方法が安定してうまくいく 方法は多くの研究室で使われ続けてきた.このような わけではないこと,保存しているうちに活性が失われ 状況は 2009 年に「相同組換え」を利用した方法が発表 やすいこと,などの問題に気がついた.学生たちとこ されると同時に,大きく変化した. の SLiCE の活性成分を調べていくうちに,市販の酵素 現在では相同組換えクローニング用のキットが市販 を混ぜるだけできわめて安価に SLiCE を再構成できる されており,誰でも簡単に目的のプラスミドを作製す ことに気づいたのが今回の方法 5)である.なお,iGEM ることが可能になっている 1)2).唯一の問題は,これら (The International Genetically Engineered Machine のキットが比較的高価であるということである.通常 competition)とは学部生の研究チームによる合成生物 1 回の反応に少なくとも 1, 000 円程度が必要とされる . 学の世界大会 (生物版の 「ロボコン」のようなもの) これは資金に余裕のある研究室から見れば大きな金額 で ,今回紹介するプロトコールは京都大学のチーム ではないが,筆者(北畠)のように資金の逼迫した研 i G E M K y o t o との共同研究の過程で生まれたもので 究者にとっては無視できない金額である.このような ある. 研究者からこれまで頼りにされてきたのが ,「S LiCE Easy homologous recombination DNA cloning with pre-made commercial enzymes Alexander Y. Liu/Hiroto Koga/Chihiro Goya/Makoto Kitabatake:Institute for Life and Medical Sciences(LiMe), Kyoto University(京都大学医生物学研究所) 598 実験医学 Vol. 42 No. 4(3 月号)2024
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