クローズアップ実験法

2024年5月号 Vol.42 No.8 詳細ページ
CoMBI法：低価格に同一標本で2D＆3Dイメージング
多鹿友喜
369 CoMBI法:低価格に同一標本 で2D&3Dイメージング 多鹿友喜 何ができるようになった? 1 つの標本ブロックから,連続ブロック面画像と少数の切片を得る.連続ブロック面画像は 3D 形 態解析および分子の 3D 分布解析に利用し ,切片は顕微鏡で 2D 組織解析に利用する .これらの 3D データと 2D 顕微鏡データを相関させて形態解析ができる. 必要な機器・試薬・テクニックは? ミクロトームで凍結ブロックやパラフィン包埋ブロックを扱う設備を ,市販のデジタルカメラとマ クロレンズ,三脚,Arduino を使った電子工作物で構築する.3D 解析には,ImageJ,3D slicer な どのフリーソフトウェアと Excel を用いる. はじめに 連続ブロック面画像は,コンピュータ上で 3D 画像に再 一般的な形態解析では,標本を薄切して切片にして 構築され,切片は染色などを施して顕微鏡観察される. 顕微鏡観察し,解剖学的情報および特定分子の分布情 その結果 ,1 つの標本で 3D 画像と 2D 顕微鏡画像を相 報を得る.薄切標本からは平面的な情報しか得られな 関させて形態解析することができる.CoMBI 法は自身 いが ,近年では小動物用の高解像度なμC T やライト の研究や共同研究に利用され ,マウス各種組織 1)∼ 6), シート顕微鏡などを用いた 3D イメージングによって, ヒト脳 1)7),アホロートル再生顎 8),ツメガエル幼生 9)10), 標本まるごとの立体的な情報を得られるようになった. ゼブラフィッシュ鰭 11),グッピー卵巣 12),カブトムシ しかし,これらの 3D イメージング設備は高額であり, 幼虫 13),ショウジョウバエ 2)など多様な生物から 3D 形 筆者は利用できる環境にはいなかった.そこで,一般 態データの取得に成功している. 的な切片作製設備と市販のデジタルカメラで行う 3D イ メージング手法,CoMBI(correlative light microscopy and block-face imaging)法を開発した 1)∼ 3). 原理 CoMBI 法では,1 つの標本をミクロトームで切削しな 標本から切片を作製する際,標本ブロックの切削面 がら次の 2 つのことを実行する:①すべてのブロック には,標本の内部形態や自然色,染色した標本の色素 面を連続撮影する,②切片を必要な枚数だけ取得する. 分布が表出している .この切削面を連続撮影してボ CoMBI is a low-cost and multi-purpose 2D and 3D imaging method Yuki Tajika:Department of Radiological Technology, Gunma Prefectural College of Health Sciences(群馬県立県民健康科 学大学診療放射線学部) 1288 実験医学 Vol. 42 No. 8(5 月号)2024
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