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Q23. 蛍光染色の感度が上がりません！
- A．蛍光スキャナやUVトランスイルミネータの励起波長や検出波長，フィルタなどを変更してみよう
- 蛍光染色試薬の波長特性が，使用している検出機器に合っていない可能性がある．蛍光染色試薬の波長特性は製品によって多様であるため，検出機器や検出条件の最適化が必要である．
- 例えば，SYPRO Rubyは主要な励起波長のピークが2つ（280 nmと450 nm）あり，Deep Purpleは主要な励起波長のピークが1つ（528 nm）である．蛍光スキャナは450 nm付近や530 nm付近の励起レーザーを有したものが多いので，これらの励起波長レーザーを備えた蛍光スキャナによって検出する場合はどちらの試薬でもOK（ただし，530 nm付近の励起レーザーのみを有したものを使用する場合はDeep Purpleの方が感度の点でやや有利）．
- 蛍光スキャナが使えなくて，UVトランスイルミネータとCCDカメラタイプイメージャーにて検出する場合は，至適励起波長から遠いので，Deep Purpleはあまり感度が良くない．一方，300 nm付近の励起波長を有するUVトランスイルミネータは一般的なので，この場合，SYPRO Rubyを使用した方が感度は高い（なお，検出用のフィルターはSYPRO Rubyの場合は618 nm付近のものを，Deep Purpleの場合は594 nm付近のものを使用する）．バイオラッドのOrioleはUVトランスイルミネータの励起に適した試薬で，レーザー励起の蛍光スキャナは使えない．
Q22染色像にスジや斑点が…定量と染色のQ&A一覧へQ24 切り出せない
プロフィール
- 森山 達哉（Tatsuya Moriyama）
- 京都大学農学部食品工学科卒．同大学院農学研究科修士課程，博士課程ののち，京都大学食糧科学研究所助手 等を経て2005年に近畿大学農学部講師，2008年准教授．その間，1996年米国スタンフォード大学招聘研究員（１年間）．毎日多くの元気な学生たちと一緒に，食品成分の生理機能性（特に脂質代謝への影響）と安全性（特にアレルゲン性）に関する研究を行っている．基礎研究だけでなく，社会の役に立つ「アウトプット」を意識した研究を進めています．
- ＜著作＞
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- 『バイオ実験で失敗しない！ タンパク質精製と取扱いのコツ』（羊土社，2007）
- 『バイオ実験で失敗しない！ 検出と定量のコツ』（羊土社，2005）
