Smart Lab Life

ウラノ先生こんにちは，クリスティーン．調子はどうですか？　私たちの一番新しいチームメンバーとして，早速始める心構えはできましたか？

クリスティーンおはようございます，ウラノ先生．元気です，ありがとうございます．準備はできています，やりますよ！

ウラノ先生よろしい．今日は，細胞培養の基本的な技術を学びましょう．私が座っている前にある，このクリーンベンチで実験を行います．ここが今日の舞台です．

クリスティーンは，熱心に聞き，見ている．

ウラノ先生まずは，ライトをつけて，クリーンベンチの表面と自分の手を，70％のエタノールで消毒しましょう．

クリスティーンなぜ，クリーンベンチと手を70％エタノールで消毒する必要があのでしょうか？

ウラノ先生注意しておくに越したことはない，ということです．クリーンベンチに入れる実験道具，ベンチの表面，私たちの手は，バクテリアなどの混入を防ぐために，すべて滅菌する必要があるのです．

細胞は，インキュベーター内で育てます．

ウラノ先生がインキュベーターを開け，293T細胞の入った10 cmの培養皿を取り出した．
そして，培養皿を部屋の別の場所にある顕微鏡のところに持って行き，レンズの下に培養皿を置いた．ウラノ先生はピントをあわせて細胞を見ている．

ウラノ先生さて，クリスティーン，これが293T細胞です．細胞を顕微鏡で見て，どのように見えるか説明してくれますか？

クリスティーンは顕微鏡をのぞきこんでいるが，困惑している様子．

ウラノ先生クリスティーン，大丈夫ですよ．マイペースでやってください．

クリスティーンええと，培養皿の底に付着している細胞が見えます．でも，何を見ているのか，はっきりわかりません．ちょっと困っています．

ウラノ先生そうだね，どの位の細胞があるかは，細胞の混み具合で表現するのが慣習なんだ．培養皿を全体として見てご覧．どのくらいの割合で，細胞が培養皿をカバーしていると思いますか？

クリスティーン培養皿の50％くらいが，接着した細胞によってカバーされているように見えます．

ウラノ先生その通り！ではこれからこの培養皿にある細胞を，２枚に分けましょう．１：２のスプリットと呼ばれる方法です．最初に，細胞を培養している培地を吸い取ります．そして，細胞を１度PBSで洗います．PBSを吸い取り，１mLのトリプシンを加えましょう．トリプシンは，37度のウォータバスで湯せんしてあります．

クリスティーン知らなくて申し訳ありませんが，トリプシンとは何ですか？

ウラノ先生トリプシンは，一種のプロテアーゼで，細胞を培養皿に付着させているタンパク質を分解するのです．培地に含まれるトリプシン阻害剤を除くために，私たちは最初に細胞を洗ったんですよ．

では細胞をトリプシン処理している間，細胞をまくための培養皿を用意しましょう．培養皿に，細胞の名前と種類，私たちのイニシャル，そして今日の日付を書いておきましょう．それぞれの培養皿には，10 mLの培地が入ります．ですので，５mLの培地が入っている培養皿に，５mLの細胞が入っている培地を加えるようにしましょう．つまり，２つのラベルした培養皿に５mLずつの培地を入れるわけです．

クリスティーンわかりました．この細胞を培養するのには，どのような培地を使用するのでしょうか？

ウラノ先生この細胞に使用する培地は，DMEMと呼ばれる培養液に10％の牛胎仔血清，１％のペニシリンとストレプトマイシン，これはペンストレップとも呼びますが，それらを含んだものです．ペンストレップは，バクテリアが増殖するのを防ぐための抗生物質です．培養液は，すでに37℃に湯せんしてあります．10分間，細胞がはがれてくるのを待って，ここでまた会いましょう．

１０分が経過し，クリスティーンは細胞培養室に戻ってきた．

ウラノ先生それでは，はがれてきた細胞を9.5 mLの培地で懸濁し，５mLずつをそれぞれの培養皿にピペットで加えましょう．そうすると，それぞれの培養皿には10 mLの培養液が入っていることになります．君も１枚の培養皿にある細胞を２枚の培養皿に分けてくれるかな．その前にはいつでも，細胞を光学顕微鏡で見て確認するようにしよう．これは難しいコンセプトです．わかりやすく説明できていればよいのですが．なにか質問はあるかな？

クリスティーンいつも細胞は，１枚から２枚へと分割して増やしていくのでしょうか？

ウラノ先生いい質問だね．細胞は，混み具合によって分割して増やしていくんだ．混んでいれば混んでいるほど，分割度を上げていく必要がありますね．つまり，例えば，もし細胞が１００％の混み具合だとすれば，私たちは１枚から４枚へと細胞を分割するでしょう．それから，細胞の種類とその増殖の早さにもよりますね．素早く増殖する細胞の場合，増殖が遅い細胞に比べて，たとえ混み具合が同じでも，分割度を上げる必要がありますね．

クリスティーンありがとうございます．

クリスティーンは，自分で細胞をまく準備ができている．