Smart Lab Life

クリスティーンは培養室でウラノ先生と待ち合わせです．

クリスティーンこんにちは，ウラノ先生．お元気ですか？

ウラノ先生おはよう，クリスティーン．元気ですよ．今日はLipofectamine 2000を使って293T細胞にGFP発現プラスミドを導入する方法を教えましょう．昨日，遺伝子導入用に293T細胞を２つのプレートに蒔いておきました．細胞が入っている培地は，遺伝子導入効率を悪くするような抗生物質を含まないものです．

クリスティーン細胞をどれくらい蒔かれたのですか？

ウラノ先生293T細胞を6cmプレートへ翌日に50～75%の混み具合になるように蒔いておきました．

ウラノ先生はいすを持ってきてクリーンベンチのところに座る．

ウラノ先生まずはじめに，遺伝子導入用の溶液を準備しなければなりません．このプロトコールでは，250μLのOptimem IにLipofectamine 2000を10μL加えたチューブが１つ，250μLのOptimem IにGFPプラスミドを4μg加えたチューブが１つ必要です．細胞培養用の冷蔵庫に保存してある共用のOptimem Iを，予め温めておきました．

ウラノ先生は溶液の準備をはじめ，クリスティーンは熱心に見て憶えている．

ウラノ先生よし，今から５分待ちます．ここまでのところはわかりましたか？

クリスティーン先生が仰ることを完璧にわかっているとは言えなそうです．

ウラノ先生質問があったらいつでも遠慮なく聞いてくださいね．君の言うことはちゃんと聞いています．それと，ワープロで書かれたプロトコールをeメールで送っておきましょう．

5分が経過．

ウラノ先生さて，それではこれらの溶液を混ぜて，クリーンベンチの中で室温で20分インキュベートしましょう．その間に私はふだん，前日に蒔いておいた細胞から培地を抜いて，代わりに新しい培地2 mLを加えるようにしているんですよ．20分後にまたここで会いましょう．残りの手順を教えます．

20分が経った．クリスティーンが培養室へ戻ってくる．

ウラノ先生さて，いよいよ混ぜた溶液を細胞のプレートに500μL加えます．細胞は24～48時間インキュベートします．今回の場合，24時間で十分です．明日の朝には，蛍光顕微鏡下で細胞を観察してGFPを見ることができます．この観察で，遺伝子導入の効率がわかるでしょう．それでは，君１人でプレートへの遺伝子導入に挑戦してみてください．細胞をチェックするために明朝ここで会いましょう．質問はありますか？

クリスティーンLipofectamine 2000がどう機能するかはわかったのですが，そのコンセプトがわかりません．もう一度説明していただけますか？

ウラノ先生わかりました．Lipofectamine 2000は正に帯電したリポソームをつくって，負に帯電したプラスミドやsiRNAに結合するのです．この正に帯電したリポソームは，負に帯電した細胞膜に結合し，融合することが可能で，遺伝物質を細胞の中に，そして核内へ送り込むことができるのです．

クリスティーンありがとうございました．それでは先生さようなら！　また明日．